1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
ARPC2肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型2抗體
ARPC4肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型4抗體
ARSI芳香基硫酸酯酶家族蛋白1抗體
ART1腫瘤抑制相關(guān)蛋白PHEMX抗體
ARVCF精神分裂癥與犰狳重復(fù)基因抗體
ALDH1乙醛脫氫酶1型抗體
phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase alpha (Ser80)磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體
phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase alpha (Ser1263)磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體
phospho-ABCA1 (Ser2054)磷酸化腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體
phospho-Aconitase 1 (Ser138)磷酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
phospho-Aconitase 1 (Ser711)磷酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase beta (Ser220)磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體
Annexin VI膜粘連蛋白6抗體
ANKRD42錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體
Anillin胞環(huán)蛋白肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
Adenovirus 5 E1A binding protein腺病毒5結(jié)合蛋白BS69抗體(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體相關(guān)分子1)
APOA1載脂蛋白A1抗體
ATG16L自噬相關(guān)蛋白16A抗體
phospho-ATG4D(Ser15)磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體
Phospho-ATG4C(Ser451)磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體
phospho-ATG7(Ser95)磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體
phospho-ATG16A(Ser287)磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體
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