1.已稀釋好的ABC和TMB顯色液在加入酶標(biāo)板孔前都應(yīng)預(yù)先在37℃中平衡至少30分鐘。試劑或樣品稀釋時(shí),切不可忘記混勻。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加1孔作為T(mén)MB空白顯色孔??倲?shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放入冰箱中。
2.將2000pg/ml,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品各100μL依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于人血清、血漿、尿液、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品100μL。
3.酶標(biāo)板加上封板膜,37℃反應(yīng)90分鐘。
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗人renin抗體工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白顯色孔除外)。
6.酶標(biāo)板加上封板膜,37℃反應(yīng)60分鐘。
7.1X洗滌緩沖液洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右(每孔洗液至少300μL)。
8.將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白顯色孔除外)。
9.酶標(biāo)板加上封板膜,37℃反應(yīng)30分鐘。
10.1X洗滌緩沖液洗滌5次,每次浸泡1~2分鐘左右(每孔洗液至少300μL)。
11.按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液,37℃避光反應(yīng)25~30分鐘。
12.注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,最佳顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3~4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3~4孔差別不明顯。
13.按每孔100μL依次加入終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
14.用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
15.有兩種設(shè)定空白對(duì)照的方案:
① 將TMB空白顯色孔(只加TMB顯色液和終止液)設(shè)為對(duì)照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去TMB空白顯色孔的吸光值后,在坐標(biāo)紙上畫(huà)出曲線,以吸光值作為縱坐標(biāo),以濃度作為橫坐標(biāo)。
② 將零孔設(shè)為對(duì)照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數(shù)據(jù)可以直接在坐標(biāo)紙上畫(huà)出曲線。
根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。
谷氨酰胺測(cè)試盒Glutamine test kit
谷氨酸測(cè)試盒Glutamate test kit
谷氨酰胺、谷氨酸(兩種均可測(cè))Glutamine and glutamic acid (two can be measured)
丙酮酸激酶(PK)測(cè)試盒Pyruvate kinase (PK) test kit
己糖激酶(HK)測(cè)試盒Hexokinase (HK) test kit
醛縮酶(ALD)測(cè)試盒Aldolase (ALD) test kit
乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)測(cè)試盒Acetylcholine transferase (ChAT) test kit
胃蛋白酶測(cè)試盒Pepsin test kit
丙酮酸測(cè)試盒Pyruvate test kit
二糖酶測(cè)試盒Two enzyme test kit
乙醇脫氫酶測(cè)試盒Alcohol dehydrogenase test kit
過(guò)氧化物酶(POD)測(cè)試盒(測(cè)組織、血清)Peroxidase (POD) test case (tissue, serum)
過(guò)氧化物酶(POD)測(cè)試盒(測(cè)植物)Peroxidase (POD) test kit (plant)
果糖測(cè)試盒Fructose test case
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