培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

      描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮細(xì)胞株，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，進(jìn)口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.938ng/ml大鼠管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA試盒(Cys18)-Atrial Natriuretic Factor (4-18) amide (mouse, rab

0.094ng/ml大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試盒Atrial Natriuretic Factor (3-28) (human, bovine, porcine)

75pg/ml大鼠尿激酶(UK)ELISA試盒Thr-Ala-Pro-Arg-Atrial Natriuretic Factor (1-28) (human, b

0.188ng/ml大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試盒Atrial Natriuretic Factor (1-24) (frog)

18.75pg/ml大鼠高敏三碘狀腺原氨(u-T3)ELISA試盒Atrial Natriuretic Factor (1-29) (chicken)

0.469ng/ml大鼠高敏狀腺素(u-T4)ELISA試盒Atrial Natriuretic Factor (1-28) (mouse, rabbit, rat), rANF

56.25pg/ml大鼠高靈敏度促狀腺激素(U-TSH)ELISA試盒Atrial Natriuretic Factor (1-28) (human),α hANF, Carperiti

18.75pg/ml大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪氨激酶2(Tie-2)ELISA試盒Aspartame-RelatedCompound A, (2S,5S)-5-Benzyl-3,6-dioxo2-p

28.125pg/ml大鼠腫瘤特生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試盒DF-2-NH2

0.094ng/ml大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試盒(Sar1,Tyr(Me)4)-Angiotensin II
Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞人性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)ELISA試盒亞碲鉀(瓊脂凍干配套試)

人性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)ELISA試盒改良纖維二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)瓊脂基礎(chǔ)

人性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)ELISA試盒3%氯化鈉三糖鐵瓊脂

人性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)ELISA試盒Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基（不含瓊脂）

人性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)ELISA試盒Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基

人性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)ELISA試盒氯化鈉多粘菌素B湯基礎(chǔ)

人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試盒60g/L氯化鈉蛋白胨水(PW)

人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試盒慶大瓊脂

人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試盒3%氯化鈉溶液

人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試盒我妻氏瓊脂